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人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr

人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr

產(chǎn)品時(shí)間:2019-04-12

簡(jiǎn)要描述:

人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr是公司一直腳踏實(shí)地,深耕市場(chǎng),洞察廣大消費(fèi)者的需求,為消費(fèi)者提供高品質(zhì)產(chǎn)品而努力,一切從客戶需求出發(fā),為客戶需求打造專業(yè)的細(xì)胞產(chǎn)品,是我司能一直跑在市場(chǎng)前沿的秘訣所在,為回饋客戶,特展開(kāi)8折優(yōu)惠溫暖沖擊波活動(dòng),盡情享受吧!

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人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
注意:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的,待細(xì)胞長(zhǎng)到70-80%匯合度時(shí),去掉培養(yǎng)液,加含500ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時(shí)間會(huì)有少部分細(xì)胞懸浮起來(lái),屬于正常情況,通過(guò)換液可以去掉,等細(xì)胞長(zhǎng)滿就可以消化 傳代了,這時(shí)可以一直用含藥物培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,兩代之后就可以將藥物濃 度提髙到l〇〇〇ng/ml,細(xì)胞凍存時(shí)不要在培養(yǎng)基中加藥物。

1.準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO);北美胎牛血清 (United States, GIBCO),

10%;雙抗 1%,添加 2mML-GUJ,添加 luM Adr。
2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
 
2)細(xì)胞處理:
1.復(fù)蘇細(xì)胞:將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。

2.細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 
3.細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
 
下面T25瓶為例;
細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻,按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)注意事項(xiàng):
收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 
細(xì)胞特性:
1)來(lái)源:ruxian癌
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣貼壁生長(zhǎng)
3)含量:>lxl06 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人ruxian癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞

,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途:僅供使用。
 

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