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人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)

產(chǎn)品時(shí)間:2019-04-12

簡(jiǎn)要描述:

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)是公司一直腳踏實(shí)地,深耕市場(chǎng),洞察廣大消費(fèi)者的需求,為消費(fèi)者提供高品質(zhì)產(chǎn)品而努力,一切從客戶需求出發(fā),為客戶需求打造專業(yè)的細(xì)胞產(chǎn)品,是我司能一直跑在市場(chǎng)前沿的秘訣所在,為回饋客戶,特展開8折優(yōu)惠溫暖沖擊波活動(dòng),盡情享受吧!

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人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)
細(xì)胞介紹:
該細(xì)胞屬源于正常腎的近曲小管細(xì)胞,通過(guò)導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生 包裝細(xì)胞Psi-2,Psi-2細(xì)胞產(chǎn)生的再去感染兼嗜性包裝細(xì)胞系PA317,后 將PA317產(chǎn)生的顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細(xì)胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2 細(xì)胞來(lái)源于單克隆。PCR檢測(cè)證實(shí)HK-2細(xì)胞基因組中含有E6/E7基因。

 
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1. 準(zhǔn)備角化培養(yǎng)基(Defined K-SFM);角化因子(500X);添 力口 5ng/mLEGF;雙抗1%。
2. 培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
 
2)細(xì)胞處理:
1.復(fù)蘇細(xì)胞:將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2.細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3.細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
 
下面T25瓶為例;
細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
注意事項(xiàng):
收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿要消毒滅菌后方能丟棄瓶中。

 
細(xì)胞特性:
1)來(lái)源:正常腎
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣
3)含量:>lxl06 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞

,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途:僅供使用。
 

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