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雞免疫球A(IgA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書

點(diǎn)擊次數(shù):551 發(fā)布時(shí)間:2023/3/15
提 供 商: 上海酶聯(lián)生物科技有限公司 資料大?。?/td>
圖片類型: 下載次數(shù): 65
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本試劑盒僅供研究使用。


檢測(cè)范圍:96T

10ng/ml -360ng/ml


使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中雞免疫球A(IgA)含量。


實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞免疫球A(IgA)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球A(IgA),再與HRP標(biāo)記的抗原,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的A(IgA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲免疫球線計(jì)算樣品中雞免疫球A(IgA)濃度。


雞免疫球A(IgA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

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標(biāo)本要

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)(HRP)活性。


操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

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2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。

4.配液:將 30倍濃30倍稀釋后備用。

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。

7.溫育:操作同 3。

8.洗滌:操作同 5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。

10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


操作程序總:

333.JPG


雞免疫球A(IgA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。


注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有析出,稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉。

6.底物請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)。

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。


保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8℃。

2.有效期:6個(gè)月

 
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